邻近标记技术的原理、技术迭代与应用举例
技术比较总结
类别 | BioID | APEX | HRP |
酶活动 | Biotin ligase(生物素连接酶) | Peroxidase(过氧化物酶) | Peroxidase(过氧化物酶) |
标记目标 | Lys(赖氨酸) | Electron-rich amino acids (Tyr, Trp, Cys, and His) (富含电子的氨基酸:酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸和组氨酸) | Electron-rich amino acids (Tyr, Trp, Cys, and His) |
大小 | BioID, AirID, TurboID: 35kDa BioID2: 24kDa miniTurboID: 28kDa BASU: 29kDa | APEX, APED2: 27kDa | 44kDa |
标记时间 | BioID, BioID2: 15-24h AirID: 1-24h TurboID, miniTurboID: 10min | 1min | 5-10min |
与底物的孵育时间 | BioID, BioID2: 15-24h AirID: 3-24h TurboID, miniTurboID: 10min | 30-60min | 5-10min |
H2O2激活 | 否 | 是 | 是 |
用于蛋白质标记的底物 | Biotin(生物素) | Biotin-phenol (Biotin-tyramide) Biotin-4-aminophenol Biotin-naphthylamine | - |
产生的自由基的半衰期 | 数分钟 | 小于1毫秒 | 小于1毫秒 |
活性区域 | 细胞内 | 细胞内 | 细胞外,分泌途径(细胞质溶胶中无活性) |
备注 | 可作为EM(电子显微镜)标签 | 可作为EM(电子显微镜)标签; 有HRP偶联抗体可用" | - |